水痘帶狀皰疹病毒IgG試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

1、應(yīng)用范圍

此酶免試劑盒可用于人血清和血漿中抗水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體的體外定性和定量檢測(cè)。

2、前言說明

水痘是一種由屬于皰疹病毒科的水痘帶狀病毒所引起的急性病毒性疾病。這種眾所周知的疾病開始表現(xiàn)為發(fā)燒，渾身不舒 服，斑丘疹，這種斑丘疹幾個(gè)小時(shí)之后就變成小泡。身上這些膿泡會(huì)變硬，要整整3周才能慢慢痊愈。這種疾病很少造成死亡，但是在成年人中，造成死亡最常見的 原因是原發(fā)性病毒性肺炎，在兒童中是續(xù)發(fā)性細(xì)菌性感染或涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染。有急性白血病或免疫抑制的兒童感染這種疾病并致死的危險(xiǎn)性更高。新生兒在 其出生5大10后就可以被感染，在出生前5天或出生后兩天被感染的嬰兒可發(fā)展成嚴(yán)重的無典型特征的水痘，這種水痘有30%的死亡率。而在早孕期感染的嬰兒 一般不會(huì)造成先天性畸形。水痘病毒再活化通常表現(xiàn)為帶狀皰疹。帶狀皰疹通常首先表現(xiàn)為單側(cè)劇烈或輕微的局部疼痛。在這種情況下，IgG抗體的濃度就增加 了，而IgM抗體的濃度僅在某些情況下才會(huì)增加。

3、實(shí)驗(yàn)原理

此固相ELISA試劑盒利用的夾心法原理。包被板上包被了抗原。用對(duì)人IgG具有特異性的酶標(biāo)二抗來檢測(cè)結(jié)合到包被抗原的樣品特異性抗體。底物反應(yīng)后，所顯示的顏色強(qiáng)度與檢測(cè)到的IgG特異性抗體的量成正比。樣品的結(jié)果可直接使用標(biāo)準(zhǔn)曲線得。

4、試劑盒組成：

4×2ml	標(biāo)準(zhǔn)品A-D	1；10；30；150U/mL，待用 標(biāo)準(zhǔn)品A=陰性質(zhì)控           標(biāo)準(zhǔn)品B=臨界質(zhì)控 標(biāo)準(zhǔn)品C=弱陽性質(zhì)控         標(biāo)準(zhǔn)品D=陽性質(zhì)控 內(nèi)含抗水痘病毒的IgG抗體，PBS（磷酸緩沖液），穩(wěn)定劑。
1×14ml	酶標(biāo)IgG	紅色，待用。內(nèi)含過氧酶標(biāo)記的抗人IgG，蛋白緩沖液，穩(wěn)定劑。
1×12×8	包被板	可拆，包被有特異性抗原。
1×14ml	TMB底物液	含TMB
1×14ml	TMB終止液	0.5M的H2SO4
1×60ml	稀釋液	含PBS緩沖液，＜0.1%NaN3
1×60ml	濃縮洗滌液	濃縮型（10×），含PBS緩沖液，吐溫20
2×	粘性金屬板	用于在溫育時(shí)遮蓋包被板
1×	塑料袋	用于儲(chǔ)存不用的板條

5、實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒不提供

1)       移液器，體積：5；50；100；500 μL

2)       校準(zhǔn)儀

3)       樣品稀釋用試管（1ml）

4)       帶試劑儲(chǔ)器8道移液器

5)       洗滌瓶，自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)

6)       能在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

7)       雙蒸水或去離子水

8)       吸水紙，取樣吸頭和計(jì)時(shí)器

6、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明

6.1成分準(zhǔn)備

稀釋/溶解	成分		稀釋液	比例	備注	貯存	穩(wěn)定性
60ml	洗滌液	加600ml	雙蒸水	1：10	加熱至37℃以溶解結(jié)晶，充分混合	2-8℃	8周

6.2樣品稀釋

樣品	稀釋	稀釋液	比例	備注
血清/血漿	全部稀釋	稀釋緩沖液	1：101	例：5μL+500μL

7、實(shí)驗(yàn)步驟：

1)       加100μL標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品或已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中，在定性檢測(cè)中只使用標(biāo)準(zhǔn)品B。

2)       封板后室溫（18℃-25℃）溫育60分鐘。

3)       移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300μL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。

4)       在每一微孔中加入100μL酶聯(lián)物。

5)       封板后室溫（18℃-25℃）溫育30分鐘。

6)       移去粘性金屬板，棄去孔中液體。用300μL洗滌液洗板3次，在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時(shí)，如果有條件的話，可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。

7)       每孔加TMB底物液100μL。

8)       室溫（18℃-25℃）避光溫育20分鐘。

9)       在每一微孔中加入100μLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動(dòng)包被板以使試劑混合均勻。此時(shí)，顏色藍(lán)色變成黃色。

10)    加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm處測(cè)OD值。

8、結(jié)果計(jì)算

在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動(dòng)生成的方法，以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對(duì) 數(shù)圖或?qū)?shù)-對(duì)數(shù)圖都可獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，用標(biāo)準(zhǔn)品的每一單值進(jìn)行計(jì)算（樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉，應(yīng)使用更加合理的單值）。樣 品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。一旦樣品稀釋了，就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測(cè)得的濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明所述對(duì)樣品進(jìn) 行稀釋，并重新檢測(cè)。

9、結(jié)果判定：

                  ＞12 U/ml  為陽性

                  8 - 12 U/ml  為可疑

                  ＜ 8 U/ml  為陰性

此檢測(cè)結(jié)果并不是任何治療結(jié)果判定的唯一因素，它應(yīng)當(dāng)結(jié)合臨床觀察和診斷結(jié)果加以判斷。

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